Réseau d'histologie expérimentale de Montpellier (RHEM)

Le RHEM a pour mission le traitement histologique et l'analyse anatomo-pathologique de tissus provenant de modèles expérimentaux. Il intervient en recherche préclinique en vue d’améliorer la compréhension des maladies, d’évaluer l’innocuité et l’efficacité de thérapies et d’identifier de nouvelles cibles pathogéniques ou thérapeutiques.

Le RHEM propose une expertise intellectuelle en amont des expérimentations, au cours des analyses ou lors de l'interprétation des résultats. Il dispense des conseils et des formations en histologie expérimentale et immunohistologie. Il développe également des technologies pour mieux caractériser les modèles expérimentés, ainsi que des ressources biologiques (biobanque de tissus expérimentaux sains et pathologiques).

Expertises et services

Analyse histopathologique sur échantillons fixés :

• Inclusion en paraffine de tissus et d’organes,
• Production de coupes sériées, pointillées, sériées/sériées, séries/pointillées, multiblocs,
• Réalisation de colorations classiques (hématoxyline-éosine, hématoxyline-éosine-safran) ou spéciales (PAS, bleu alcian, trichrome de Masson, rouge sirius, Perls…),
• Réalisation d’immunomarquages chromogéniques ou fluorescents, simplex ou multiplex, marqueurs de prolifération, d’apoptose, de cellules immunitaires, voies de signalisation…
• Réalisation d’hybridations in situ chromogéniques ou fluorescentes (sonde Alu),
• Production de blocs TMA (tissue microarrays) à partir de blocs de chercheurs ou du RHEM,
• Obtention de lames virtuelles à l’aide d’un scanner de lames en collaboration avec la plateforme Montpellier ressources imagerie (MRI),
• Analyse lésionnelle par un pathologiste vétérinaire.

Reconstruction 3D d’échantillons par transparisation :

• Transparisation de tissus et d’organes (technique X-Clarity),
• Réalisation d’immunomarquages in toto.

Formation en histologie expérimentale et immunohistologie :  

• Fixation par perfusion intracardiaque,
• Prélèvement d'organes,
• Cryoconservation et enrobage en paraffine,
• Préparation de coupes au cryostat, microtome ou vibratome,
• Réalisation de colorations,
• Immunomarquage en peroxydase et fluorescence,
• Transparisation par la technique X-Clarity et immunomarquage in toto.

Moyens et équipements

Analyse histopathologique sur échantillons fixés :

• Automate d’imprégnation en paraffine,
• 3 stations d’enrobage en paraffine,
• 3 microtomes,
• Graveur de lames,
• Automate de coloration,
• Module de démasquage,
• Automate d’imprégnation en paraffine, démasquage et décalcification,
• Automate d'immunomarquage et d’hybridation in situ Ventana Discovery Ultra pour des marquages en visible et fluorescence, simplex et multiplex,
• Colleuse de lamelles,
• Tissue microarrayer 3D Histech et sélection de carottes sur lames virtuelles,
• Microscope à fond clair avec caméra.

Reconstruction 3D d’échantillons par transparisation :

• Système X-Clarity (clearing and polymerization system).

Equipements mis à disposition :

• 2 microtomes, SnapFrost, 2 cryostats, vibratome et microscope à épifluorescence.

Comment soumettre un projet ?

Pour soumettre un projet au RHEM, contactez par mail les responsables de la méthodologie ou de l’activité concernée, en décrivant votre projet et vos besoins : analyse histologique (Nelly Pirot), reconstruction 3D par transparisation (Chantal Ripoll), mise à disposition d’équipements (Nelly Pirot, Chantal Ripoll) et formation (Nelly Pirot).

L’équipe du RHEM vous recontactera pour étudier avec vous la faisabilité du projet, la meilleure stratégie de prise en charge de vos échantillons et la nature des services qui peuvent vous être offerts. Une réponse vous sera adressée dans les deux semaines suivant la demande. Les projets sont sélectionnés sur la base de leur faisabilité, y compris en termes de temps et de ressources humaines à consacrer.  Le délai nécessaire à la réalisation des expériences varie selon le type de service sollicité.

Exemple d'utilisation

Etude du rôle d’E4F1 dans l'homéostasie cutanée

L’équipe de Laurent Le Cam à l’Institut de recherche en cancérologie de Montpellier (IRCM) s'intéresse à la dérégulation de circuits moléculaires impliqués dans le vieillissement et la tumorigenèse. Elle travaille notamment sur la caractérisation des nouveaux mécanismes de régulation du réseau p53 (P53, E4F1, MDM2), voie clé de la suppression de tumeurs.

Les chercheurs utilisent des souris génétiquement modifiées, obtenues par la technologie Cre/Lox-P. La caractérisation de ces modèles animaux a nécessité des analyses histologiques détaillées. Le RHEM assure le traitement de routine de ces tissus : inclusion, coupe, coloration et immunomarquage. Depuis 2014, environ 1 970 échantillons de tissus et près de 1 750 lames provenant de la quinzaine de modèles différents détenus par l’équipe ont été analysés. La production de TMA (tissue microarrays) a permis d’accélérer l'analyse de ces modèles animaux et de réduire les coûts associés.

Ainsi, le RHEM est associé à un résultat démontrant que la perte d’expression du facteur de transcription E4F1 dans les kératinocytes entraîne des défauts de l'épiderme et l'épuisement de la niche de cellules souches épidermiques.

Pour en savoir plus : Goguet-Rubio P. et al. (2016). E4F1-mediated control of pyruvate dehydrogenase activity is essential for skin homeostasis. PNAS, 2016, 113(39):11004-9.

Contact

RHEM
Institut de recherche en cancérologie de Montpellier (IRCM)
208 rue des apothicaires
34298 Montpellier
Région : Occitanie+33 (0)4 67 61 24 19
florence.bernex@inserm.fr
Site de la plateforme

 

THÉMATIQUES : Histologie, anatomopathologie

RESPONSABLES SCIENTIFIQUES :
Florence Bernex

RESPONSABLES TECHNIQUES :
Nelly Pirot

RESPONSABLES QUALITÉ :
Yohann Noel

CERTIFICATIONS :

TUTELLES : CNRS, Inserm, Université de Montpellier

LABELLISATION IBiSA : 2014

MOTS CLÉS : Histopathologie expérimentale, Modèles animaux de maladie humaine, Phénotypage histologique, Microscopie virtuelle, Biobanque expérimentale, Immunomarquage, Analyse anatomopathologique, Multiplex, Hybridation in situ, Tissue microarray, TMA, Blocs de paraffine, Lames histologiques, Transparisation, Reconstruction 3D, Analyse lésionnelle, Formation en histologie, Formation en immunohistochimie et immunofluorescence, Technique du RITA, Lames virtuelles.

Fiche mise à jour en 2023

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