Production de protéines recombinantes (P2R)

La plateforme P2R offre un large éventail de compétences pour la production et purification de protéines recombinantes, d’anticorps natifs ou recombinants. Elle met à disposition son expertise pour la production de complexes CMH/peptide de classe I multimérisables humains, murins ou de rat, et produit également le CMH non conventionnel HLA-E, ainsi que des protéines apparentées telles que MR1 murin et MicA humain.

P2R accompagne ses utilisateurs dans leurs projets de criblage d’épitopes et de caractérisation de populations lymphocytaires T, en produisant des complexes CMH/peptide de classe I au format 96 puits. La plateforme propose aussi son expertise pour la production de protéines recombinantes, en particulier pour la recherche dans le domaine de la santé. Elle réalise des contrôles analytiques par chromatographie liquide (exclusion stérique, phase inverse) ou par stabilité thermique par nanoDSF sur protéines, anticorps et peptides. P2R réalise également des purifications à la demande, des tests de stabilité et de criblage de conditions de stockage. La plateforme a pour perspective de développer des outils d’affinité dédiés aux complexes CMH/peptide.

Expertises et services

Production de protéines recombinantes :

• Production à façon de monomères HLA/peptide de classe I biotinylés ou non et multimérisables, humains, murins et de rat, avec accompagnement pour la production à moyen débit de complexes CMH/peptide par échange peptidique au format plaque 96 puits,
• Production de protéines en système procaryote : réalisation de tests pilotes d’expression de clones bactériens en petit volume et production de corps d’inclusion ou de protéines sécrétées à partir de 3L de culture bactérienne,
• Production de protéines en systèmes eucaryotes : réalisation de tests d’expression transitoire en cellules HEK293, ExpiCHO-S ou Expi293, production à partir de clones stables en incubateur ou bioréacteur à usage unique (1 à 20L) et concentration par filtration frontale (sous pression d'azote) ou tangentielle (SartoFlow Study),
• Production de protéines en système acellulaire RTS.

Purification de protéines et peptides :

• Purification de protéines étiquetées : GST-Trap, His-Trap, Avi-Tag…
• Mise au point de schémas de purification par chromatographie (exclusion, échange d’ions, interaction hydrophobe, phase inverse, affinité…) pour l’obtention de la pureté requise,
• Purification de peptides et identification en spectrométrie de masse. 

Autres prestations de service :

• Contrôle analytique des protéines produites (ELISA, exclusion stérique, gel d’acrylamide),
• Etude de la stabilité thermique de protéines par nanoDSF, réalisation de tests de criblage de tampons et de températures de conditionnement, suivi de lots,
• Réalisation de tests de détection des endotoxines et élimination sur colonne,
• Mise à disposition des équipements de chromatographie liquide de la plateforme pour une utilisation en autonomie après formation sur le logiciel de pilotage.

Moyens et équipements

• Laboratoire L1 de culture cellulaire avec hotte à flux laminaire, incubateur mammifère statique et à agitation, microscope et bioréacteur eucaryote à usage unique Celligen Blu (Eppendorf),
• Laboratoire de biochimie avec incubateur procaryote à agitation, systèmes de concentration par filtration tangentielle SartoFlow Study (Sartorius) et de production acellulaire RTS (Roche),
• Equipement de nanoDSF Prometheus NT.48 (NanoTemper) pour les tests de stabilité thermique et d’agrégation des protéines, 
• Equipements de chromatographie liquide : HPLC Akta (Cytiva), HPLC NGC Quest 10 (Bio-Rad), FPLC réfrigérée Akta (Cytiva) et HPLC analytique Alliance (Waters).

Comment soumettre un projet ?

La plateforme P2R est ouverte aux équipes de recherche académiques et aux entreprises. Pour soumettre un projet, vous pouvez contacter la plateforme à l’adresse p2r.pf@univ-nantes.fr ou remplir le formulaire de contact mis à votre disposition sur son site internet. Une réunion ou un entretien vous sera proposé afin d’étudier la faisabilité de votre projet et établir un cahier des charges. Deux modalités d’accès à la plateforme peuvent être envisagées : un mode collaboratif si le projet nécessite l’investissement des ingénieurs de la plateforme pour du développement, ou un mode prestation de service si les techniques à utiliser sont déjà décrites et validées.

Pour les prestations analytiques ou la production de complexes CMH/peptide de classe I, un formulaire vous sera soumis. Les expériences démarreront après réception du document complété. Les équipements de la plateforme sont par ailleurs accessibles pour une utilisation en autonomie après formation par le personnel de P2R et signature du règlement de la plateforme.

Exemple d'utilisation

Production de complexes MR1/ß2m/ligand chez la souris

La plateforme P2R a été sollicitée par un laboratoire académique pour produire des complexes CMH/peptide non classiques MR1/ß2m/ligand de souris. Le développement de ces molécules, non disponibles en routine sur la plateforme et difficiles à produire, a abouti à une collaboration et ouvert des perspectives intéressantes quant à l'étude des cellules MAIT chez la souris.

Le projet a ensuite évolué vers la mise au point d’une méthode de production de complexes MR1/ß2m/ligand chez d’autres espèces, notamment l'opossum. L’approche est basée sur l'analyse des thymocytes tétramères positifs par single-cell RNA-Seq. L’objectif est d'obtenir une vue d'ensemble sur les programmes transcriptionnels des cellules MAIT au cours de l'évolution et de modéliser le développement thymique à l’origine de ces programmes transcriptionnels.

Pour en savoir plus : Legoux F. et al. (2019). Molecular mechanisms of lineage decisions in metabolite-specific T cells. Nature Immunology, 20(9):1244-1255. .

Contact

Plateforme de protéines recombinantes P2R
Inserm UMS 016 Biocore
Bâtiment Nantes Biotech
22 Boulevard Bénoni Goullin
44200 Nantes
Région : Pays de la Loire02 28 08 03 78
p2r.pf@univ-nantes.fr
Site de la plateforme

THÉMATIQUES : Autres

RESPONSABLES SCIENTIFIQUES :
Frédéric Pecorari

RESPONSABLES TECHNIQUES :
Karine Bernardeau

TUTELLES : CHU de Nantes, CNRS, Inserm, Nantes Université

LABELLISATION IBiSA : 2020

MOTS CLÉS : CMH/peptide, Tétramères, Protéines recombinantes, Purification, Production, Anticorps, nanoDSF, Immunologie, Conditionnement, HPLC, Bioréacteur, Contrôle analytique, Stabilité thermique, MR1, MicA, HLA, Chromatographie liquide, Echange peptidique, Endotoxines, Procaryote, Eucaryote

Fiche mise à jour en 2021

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