Plateforme d'imagerie cellulaire et tissulaire (PICT)

Outils, méthodologies et expertises en microscopie pour la caractérisation et quantification du vivant : microscopie photonique, à haut débit, électronique et cryo-électronique, analyse d'images.

Site de la plateforme

Plateforme d'imagerie cellulaire et tissulaire (PICT)

Site de la plateforme

Plateforme d’imagerie cellulaire et tissulaire (PICT)

La plateforme PICT rassemble des équipements sophistiqués et des technologies de pointe en microscopie avancée. Elle fournit aux chercheurs de biologie cellulaire et structurale, de biologie du développement, de chimie-biologie et de physique de la cellule des approches d’imagerie à différentes échelles, spatiales et dynamiques, dans des contextes sains ou pathologiques.

La plateforme est organisée autour de trois pôles : microscopie photonique, microscopie électronique et microscopie à haut-contenu. La microscopie photonique s’étend de l’imagerie dynamique à la super-résolution. La microscopie à haut débit permet le criblage cellulaire de banques chimiques et siRNA. La microscopie électronique et la cryo-microscopie électronique renseignent quant à elles la structure moléculaire et l’ultrastructure cellulaire. La plateforme PICT propose également une expertise en traitement et analyse de données.

Expertises et services

Microscopie photonique :

Mise à disposition d’équipements (vidéo-microscopie confocale, multi-photon, à feuille de lumière, super-résolue, lattice lightsheet, intravitale, FLIM…) et de logiciels d’analyse,
Formation à l’utilisation des équipements de la plateforme,
Microscopie appliquée à la biologie : FRAP, optogénétique, imagerie sur échantillons vivants, photo-ablation, molécule unique, SRRF...
Assistance pour la mise en place d’expériences,
Analyse et traitement de données,
Développement technologique.

Microscopie électronique :

Mise à disposition d’équipements pour la préparation d’échantillons, l’immunomarquage, la vitrification par haute pression, cryo-substitution de cellules, cryo-microscopie électronique et cryo-tomographie de systèmes in vitro, et cartographie chimique,
Formation à l’utilisation des équipements de la plateforme,
Microscopie appliquée à la biologie (cryo-microscopie, tomographie et cryo-tomographie, single particle...) et microscopie corrélative (photonique, électronique),
Assistance pour la mise en place d’expériences,
Analyse et traitement des données,
Développement technologique.

Microscopie à haut débit et criblage cellulaire :

Développement de tests cellulaires pour l’identification rapide et à large échelle des protéines marqueurs d’un statut physiologique ou d'une réponse fonctionnelle présentant un intérêt thérapeutique,
Criblage de petites molécules et analyse des profils phénotypiques de banques d'ARNs interférents et de chimiothèques en fonction de leur intérêt théorique.

Moyens et équipements

Microscopie photonique :

Plus de 45 microscopes de pointe : vidéo-microscope, microscopes TIRF, confocaux à balayage, spinning disk et multi-photons, à feuille de lumière (lightsheet), à durée de vie de fluorescence (FLIM), de super-résolution à illumination structurée (SIM), PALM/STORM, lattice lightsheet, intravital.

Microscopie électronique :

3 microscopes électroniques et instruments pour la préparation d’échantillons,
Equipements pour la préparation d’échantillons en résine : ultramicrotomes Leica UCT,
Equipements pour l’immunomarquage : ultra-cryomicrotomes Leica UC6 et UC7,
Equipements pour la préparation d’échantillons congelés : Leica EMGP (cryo-plonge), Leica EM-CPC (congélation), Leica HPM100 (congélation à haute pression), Leica AFS et AFS2 (cryo-substitution),
Microscope électronique Thermo Fisher G2, 200 kV pour la cryo-EM, la cryo-tomographie et tomographie à chaud, avec caméra 4K CMOS TemCam F416 (TVIPS),
Microscope Thermo Fisher Spirit 120 kV pour l’imagerie 2D cellulaire, la coloration négative et l’immunomarquage, avec caméra 4K CCD Quemesa (EMSIS),
Stations de calcul pour la reconstruction 3D, programme IMOD, Relion, DYNAMO, MotionCorr2 et CTFfind4.

Criblage cellulaire :

Laboratoire situé dans un environnement de sécurité L2 équipé de systèmes robotiques EVO Tecan et de 2 systèmes d’imagerie IN Cell 2200 et IN Cell 6500HS.

<hr>Reconstruction et segmentation d’un endo-lysosome dans une cellule HeLa. Tomographie. © I. Hurbain, équipe Raposo.

<hr>Aile de drosophile durant la métamorphose. Microscopie confocale à fluorescence © P.L. Bardet, équipe Bellaïche.

<hr>Embryon de drosophile au cours du développement. Microscopie confocale à fluorescence. © G. Edwards.

<hr>Immunomarquage (Tokuyasu) des cavéoles dans l’épiderme. Noyau (N), cavéoles (flèches blanches), membrane plasmique (flèches noires). © M. Romao, équipe Raposo.

<hr>Reconstruction 3D et segmentation de filament de septines (en bleu) sur du PIP2 (en jaune). Cryo-tomographie. © A. Bertin, équipe Lévy.

<hr>Cryo-EM de myosine 1b liée à une vésicule contenant du PIP2 (têtes en rouge, queues en bleu et domaines fixant le PIP2 en jaune). © A. Di Cicco, équipe Lévy.

<hr>JEOL 2200FS, cryo-MET 200 kV équipé d'un filtre d'énergie et d'un canon FEG sur le pôle MET de la plateforme PICT à Orsay.

<hr>Etude par cryo-MET de l'organisation supramoléculaire de polymères. La segmentation permet de colorer et mettre en évidence les différentes structures observées. © M.H. Li, ENSCP.

<hr>Migration de cellules humaines de mélanomes métastatiques. Microscopie en lumière blanche © D. Lécuyer, U3347-U1021.

<hr>Internalisation de peptide dans des cellules. Microscopie confocale à fluorescence © L. Méry, U3347-U1021.

<hr>Glande mammaire de souris. Microscopie confocale à fluorescence © R. Veronica, équipe Fre.

Comment soumettre un projet ?

Envoyez un mail à l’adresse info.pict@curie.fr, décrivez brièvement votre projet et précisez le plateau concerné : microscopie optique, microscopie électronique, criblage cellulaire ou microscopie ionique. L’équipe de PICT vous recontactera pour étudier avec vous la faisabilité du projet et la nature des services que la plateforme peut vous offrir. Une réponse vous sera adressée dans le mois suivant la demande. Le délai nécessaire à la réalisation des projets varie en fonction du type de collaboration ou de service sollicité.

Exemple d'utilisation

Criblage cellulaire pour l’identification des effecteurs de la réponse immunitaire dirigée contre l’infection par le virus Zika

Nolween Jouvenet de l’Unité de génomique virale et de vaccination de l’Institut Pasteur a contacté Elaine Del Nery, responsable du plateau de criblage de la plateforme PICT, avec l’objectif d’identifier par criblage cellulaire les effecteurs de la réponse immunitaire à l’infection par le virus Zika (ZikV). La réponse immunitaire est initiée par la reconnaissance du génome viral par les récepteurs de la cellule. Cette interactionsdéclenche l'expression de l'interféron de type I (IFN). Les IFN sécrétés invoquent alors un puissant état antiviral dans la cellule, conduisant à l’augmentation de l’expression des gènes ISG.

ZikV est un flavivirus transmis par les moustiques. Son interaction avec la cellule hôte est mal caractérisée. La signalisation IFN de type I est essentielle pour la réplication et la pathogenèse du virus. Dans le cadre de l’étude, la plateforme a identifié et caractérisé les ISG qui inhibent sa réplication. Pour ce faire, une bibliothèque de siRNA ciblant environ 400 ISG humains individuels a été examinée à l'aide d'essais à haut débit basés sur la fluorescence.

Pour en savoir plus : Petrova E. et al. (2019). Uncovering flavivirus host dependency factors through a genome-wide gain-of-function screen. Viruses, 11(1):68.