Plateforme de microscopie de Rennes (MRic)

La plateforme MRic s'articule autour de deux plateaux techniques : MRic-Photonics pour la microscopie photonique et MRic-TEM pour la microscopie électronique. Elle propose un accès réglementé à des systèmes d'imagerie, une aide scientifique et technique à la conception de projets et d'expériences, une activité de recherche et développement dédiée à la conception de prototypes de microscopes et des formations aux techniques de microscopie.

Les techniques proposées sur la plateforme sont les suivantes : vidéomicroscopie, confocal, spinning disk, feuille de lumière, F-techniques (FRAP, FRET, FLIM, FCS, FCCS, FLCS), super-résolution (STORM, Airyscan), multiphoton, photomanipulation, microscopie électronique à transmission cellulaire et moléculaire, cryo-tomographie et microscopie corrélative.

Expertises et services

• Conseil et accompagnement pour les projets en microscopie : préparation d’échantillons, acquisition d’images, analyse et interprétation des résultats,
• Mise à disposition d’équipements après formation,
• Visualisation et quantification de la fluorescence de cellules vivantes ou fixées,
• Observation de structures à l’échelle subcellulaire,
• Mesure de flux calciques,
• Evaluation d’interactions protéines-protéines,
• Visualisation de biosenseurs,
• Imagerie d’échantillons épais ou de tissus,
• Analyse d’images,
• Cryo-microscopie électronique,
• Congélation haute pression,
• Cryo-tomographie cellulaire et moléculaire,
• Reconstruction tridimensionnelle de complexes moléculaires.

Moyens et équipements

Microscopie photonique :

• 3 microscopes champ large dont 2 microscopes équipés d’une enceinte régulée en CO₂ et température, 1 microscope droit avec caméra emCCD et 1 microscope équipé pour l’imagerie calcique, avec DG4 couplé à un système d'acquisition à caméra sensible, et logiciel Metafluor,
• 2 microscopes spinning disk dont 1 microscope équipé d’une tête de photomanipulation et 1 microscope équipé d’une camera emCCD,
• 6 microscopes confocaux dont 3 microscopes droits, 2 microscopes équipés d’un laser IR femto, 1 microscope équipé d’une tête de photomanipulation avec un laser UV pulsé, 2 microscopes équipés pour la FCS, 1 microscope équipé d’une détection TCSPC pour le FLIM et la FLCS et 1 microscope équipé d’un module de super-résolution Airyscan,
• Microscope fastFLIM sur une base spinning disk équipé d’une tête de photomanipulation,
• Microscope à feuille de lumière,
• Microscope de super-résolution par localisation de molécules individuelle (STORM/PALM)
• Platine motorisée pour le multiposition sur quasiment tous les microscopes, dont certains sont également équipés de prismes ou d’anneaux de phase pour le Normarski ou le DIC,
• Stations de traitement et d’analyse d’images.

Microscopie électronique :

• Microscopes électroniques en transmission JEM 1400 Jeol, 100 CXII Jeol, CM12 Philips, Tecnaï G2 Sphera FEI...
• Ultramicrotomes UC7 et UCT Leica,
• Cryo-ultramicrotomes UC7 Leica,
• Système de congélation haute pression EM PACT2 Leica,
• Automate d'immunomarquage EGL Leica

Comment soumettre un projet ?

La plateforme MRic est accessible aux équipes de recherche académiques et privées. Si vous êtes nouvel utilisateur, contactez la plateforme par mail à l’adresse marc.tramier@univ-rennes1.fr et expliquez votre besoin. Après formation, vous pourrez accéder aux microscopes en toute autonomie et réserver les équipements depuis le site internet. La facturation sera établie sur la base du nombre d’heures réservées (tarifs sur demande). Pour une prestation de service, les modalités seront définies au premier rendez-vous.

Exemple d'utilisation

Adaptation de la technique Tokoyasu pour l'étude du ver C. elegans

L'adhésion cellule-cellule est essentielle pour l'intégrité du tissu épithélial. Pourtant, la localisation subcellulaire précise des protéines de jonction n'a jamais été déterminée dans les cellules épithéliales du modèle C. elegans. La microscopie confocale a montré qu'il existe deux complexes différents, le premier comprenant la E-cadhérine (E-cad) et le second l'orthologue du disque de grande taille (Dlg). Cependant, en microscopie électronique (EM), il n’est possible d’observer qu’une structure homogène dense aux électrons. Afin de localiser ces protéines au niveau ultrastructural dans la structure dense en électrons, la plateforme MRic a développé de nouvelles méthodes d'immuno-EM (IEM).

Les experts de la plateforme ont testé diverses conditions de fixation et établi un protocole permettant une conservation fiable et cohérente de tous les tissus. Ils ont ensuite testé en parallèle les protocoles IEM, montrant que la meilleure méthode reposait sur la technique Tokoyasu encore jamais adaptée à C. elegans, alors que les protocoles classiques d’IEM n’ont pas été satisfaisants. Avec l’utilisation d’un anticorps anti-actine, la méthode a permis une augmentation robuste de cinq fois la coloration. Aujourd’hui, elle est régulièrement exploitée pour analyser la collection d’anticorps de la plateforme.

Pour en savoir plus : Nicolle O. et al. (2015). Adaptation of cryo-sectioning for IEM labeling of asymmetric samples: a study using Caenorhabditis elegans. Traffic, 16(8):893-905.

Contact

MRic
UMS Biosit
Campus santé de Villejean
2 avenue du Pr Léon Bernard
35043 Rennes
Région : Bretagne+33 (0)2 23 23 49 94
marc.tramier@univ-rennes1.fr
Site de la plateforme

THÉMATIQUES : Biologie structurale, biophysique, biochimie, Imagerie cellulaire

RESPONSABLES SCIENTIFIQUES :
Marc Tramier (MRic), Sébastien Huet et Frédéric Mourcin (MRic-Photonics), Denis Chrétien et Grégoire Michaux (MRic-TEM)

RESPONSABLES TECHNIQUES :
Stéphanie Dutertre (MRic-Photonics), Agnès Burel (MRic-TEM)

RESPONSABLES QUALITÉ :
Stéphanie Dutertre

CERTIFICATIONS :

TUTELLES : CNRS, Inserm, Université de Rennes

INFRASTRUCTURES NATIONALES : France BioImaging, FRISBI

LABELLISATION IBiSA : 2009

MOTS CLÉS : Epifluorescence, Micro-injection, Vidéomicroscopie, Confocal, Spinning disk, F-techniques, FRAP, FRET, FLIM, FCS, FCCS, FLCS, Photo-manipulation, Multiphoton, Feuille de lumière, Super-résolution, Microscopie électronique à transmission, Cryo-microscopie électronique, Congélation à haute pression, Tomographie

Fiche mise à jour en 2021

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