Nanobodies

Sélection et criblage d’anticorps à domaine unique (nanobodies) de lamas et accompagnement des équipes de recherche dans l’obtention de nanobodies d’intérêt.

Site de la plateforme

Nanobodies

Sélection et criblage d’anticorps à domaine unique (nanobodies) de lamas et accompagnement des équipes de recherche dans l’obtention de nanobodies d’intérêt.

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La plateforme Nanobodies génère des fragments d’anticorps particuliers, dérivés d’anticorps de lamas, appelés single domain antibodies ou nanobodies. Ces petits fragments compacts (15 kDa) se lient de manière stable à leur antigène avec des affinités de l’ordre du nanomolaire, mais aussi à des épitopes inaccessibles aux anticorps conventionnels.

Les étapes d’immunisation, sélection et criblage des nanobodies par phage display peuvent être réalisées à partir de protéines recombinantes, de cellules (transfectées, lignées…) et de fractions membranaires. Les nanobodies peuvent être produits dans E. coli avec différentes étiquettes (c-Myc, 6-His...) et une cystéine C-terminale pour une conjugaison orientée à des nanoparticules. Ils peuvent être biotinylés enzymatiquement in vivo grâce à une étiquette Avitag, ou encore être marqués grâce à l’enzyme sortase et la click-chemistry. Les nanobodies peuvent ainsi être directement utilisés comme sondes pour le diagnostic et l’immunothérapie.

Expertises et services

Immunisation de lamas (effectuée en sous-traitance),
Accueil, encadrement et formation de chercheurs, techniciens et étudiants pour réaliser les étapes de sélection, de criblage et de production de nanobodies contre une cible donnée,
Formation et mise à disposition des réactifs et équipements nécessaires à la construction des banques permettant l’expression des nanobodies à la surface de bactériophages,
Accompagnement dans la réalisation des étapes d’enrichissement par phage diplay et de criblage de clones isolés par cytométrie de flux ou ELISA,
Accompagnement dans la production des meilleurs candidats dans E. coli et purification par affinité à l’échelle du milligramme.

Moyens et équipements

Construction de banques :

4 postes de paillasse entièrement équipée pour la biologie moléculaire,
Poste d’électrophorèse ADN entièrement équipé avec lecteur de gel (Major Science),
Poste d’électrophorèse pour protéines entièrement équipé avec lecteur de gel (GelDoc EZ Image) et Trans-Blot Turbo,
2 appareils de PCR,
Centrifugeuse Megafuge 40R multi-rotor,
2 étuves bactériologiques de 30°C et 37°C,
Réfrigérateur et congélateurs à -20°C et -80°C pour le stockage des banques.

Sélection et criblage :

Robot Tecan couplé à un cytomètre (piqueur de cellules, Elisa, cytométrie),
Spectromètre Tecan infinite M1000 (fluorescence, bioluminescence et HTRF),
3 postes de sécurité microbiologique (PSM),
15 micro-incubateurs de microplaques,
Centrifugeuse 3SR+ (multi-rotor),
Réfrigérateur, congélateur et centrifugeuse de paillasse.

Biologie cellulaire (production de cellules pour criblage différentiel) :

3 postes de sécurité microbiologique (PSM),
2 incubateurs CO₂,
Microscope,
Compteur de cellules,
Centrifugeuse de paillasse,
Bain à 37°C.

Production, purification et validation des nanobodies :

5 incubateurs-agitateurs bactériologiques de type Infors,
Fermenteur de 15 litres,
Centrifugeuse de 6 x 1 litre,
Système de filtration tangentielle Cogent micro-scale,
Système de purification AKTA.

<hr>Préparation d’un lama pour une injection.

<hr>Injection d’antigènes en sous-cutané à un lama.

<hr>Les nanobodies sont des fragments d’anticorps à domaine unique dérivés d’anticorps de lamas.

<hr>Les différents formats d’anticorps de lama.

<hr>Automatisation des étapes de sélection et de criblage.

<hr>Repiquage automatique de bactéries exprimant le phage nanobody.

<hr>Etapes de la technologie pour la sélection et le criblage.

<hr>Utilisation d’un nanobody en immunohistochimie du cancer du sein (cellules cancéreuses en haut et saines en bas).

Comment soumettre un projet ?

Pour soumettre un projet à la plateforme Nanobodies, contactez par mail le responsable scientifique et technique, Patrick Chames. Les projets pris en charge sont généralement réalisés en collaboration et financés par des contrats académiques de type ANR, ARC, européens, FUI… Dans certains cas, la plateforme propose néanmoins des prestations de services. Dans ce cas, un devis est adressé au client. Les tarifs des différentes prestations possibles ont été déposés à l’Inserm, organisme gestionnaire en charge de la facturation.

Exemple d'utilisation

Sélection de nanobodies contre des protéines membranaires

Dans le cadre d’une collaboration entre deux partenaires académiques et une entreprise, la plateforme Nanobodies a été mise à contribution pour sélectionner un panel de nanobodies contre plusieurs protéines membranaires de la famille des RTK (EGFR, HER2, HER3) et GPCR (mGluR1, 2, 4, 5, 7, CXCR4). L’objectif était de générer des senseurs conformationnels et des kits de dosage après marquage par un fluorochrome.

Pour en savoir plus : Scholler P. et al. (2017). Allosteric nanobodies uncover a role of hippocampal mGlu2 receptor homodimers in contextual fear consolidation. Nature Communications, 8(1):1967.

Contact

Nanobodies
CRCM, UMR7258, U1068
Aix-Marseille Université
163 avenue de Luminy
13009 Marseille
Région : Provence-Alpes-Côte d'Azur+33 (0)4 91 82 88 33
patrick.chames@inserm.fr
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